亚洲一区不卡高清精品_野狼自幕无线码中文字_免费少妇综合无码_国产真实伦对白视频全集_三级精品自拍亚洲_日韩无码中文字幕婷婷视频免费_18禁秘 啪啪污污网_国产一级—级内欧洲_欧美另类自拍_日韩美女丝袜福利一区二区

菌種培養(yǎng)德阿昆哈假單胞菌（Pseudomenasdaconhae)68種異株的培養(yǎng)，采用斜面培養(yǎng)基，組成為蛋白胨0.25%,牛肉膏0.52%,酵母膏0.25%,NaCl0.5%,pH7.0,瓊脂2.0%。種子培養(yǎng)基與斜面培養(yǎng)基相同，但不加瓊脂，250mL三角燒瓶中培養(yǎng)基裝量為40mL.搖瓶培養(yǎng)基的組成為古氨酸3.0%,蛋白胨0.9%,酪蛋白水解液0.5%,磷酸二氫鉀0.05%,MgSO4.7H2O0.01%,用氨水調(diào)pH為7.2,500ml三角瓶中培養(yǎng)基裝量為80ml,將培養(yǎng)24h的新鮮斜面菌種接種于種子培養(yǎng)基中，30℃振搖培養(yǎng)8h,再接種于搖瓶培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)24h,如此逐Chemicalbook漸擴大至1000-2000ml的培養(yǎng)罐中培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后用1mol/LHCl調(diào)pH到4.75,30℃保溫1h。用轉(zhuǎn)筒式離心機離心，收集菌體備用（含L-天冬氨酸-β-脫羧酶）。細胞固定取上述濕菌體20kg,加生理鹽水攪拌均勻并稀釋至40L。另取溶于生理鹽水的50g/L(5%)角叉菜膠溶液85L，兩液均保溫45℃后混合，冷卻至5℃成膠，浸于600L含20g/L(2%)KCl和0.2mol/L己二胺0.5mol/L、pH7.0的磷酸鹽緩沖液中，5℃攪拌10min,加戊二醛至0.6mol/L,5℃攪拌30min,取出切成3-5mm3小塊，用20g/LKCl溶液充分洗滌后，濾去洗液即得，備用。